- · 《文物鉴定与鉴赏》栏目[05/29]
- · 《文物鉴定与鉴赏》数据[05/29]
- · 《文物鉴定与鉴赏》收稿[05/29]
- · 《文物鉴定与鉴赏》投稿[05/29]
- · 《文物鉴定与鉴赏》征稿[05/29]
- · 《文物鉴定与鉴赏》刊物[05/29]
一、本刊要求作者有严谨的学风和朴实的文风，提倡互相尊重和自由讨论。凡采用他人学说，必须加注说明。 二、不要超过10000字为宜，精粹的短篇，尤为欢迎。 三、请作者将稿件（用WORD格式）发送到下面给出的征文信箱中。 四、凡来稿请作者自留底稿，恕不退稿。 五、为规范排版，请作者在上传修改稿时严格按以下要求： 1．论文要求有题名、摘要、关键词、作者姓名、作者工作单位（名称，省市邮编）等内容一份。 2．基金项目和作者简介按下列格式： 基金项目：项目名称（编号） 作者简介：姓名（出生年－），性别，民族（汉族可省略），籍贯，职称，学位，研究方向。 3．文章一般有引言部分和正文部分，正文部分用阿拉伯数字分级编号法，一般用两级。插图下方应注明图序和图名。表格应采用三线表，表格上方应注明表序和表名。 4．参考文献列出的一般应限于作者直接阅读过的、最主要的、发表在正式出版物上的文献。其他相关注释可用脚注在当页标注。参考文献的著录应执行国家标准GB7714-87的规定，采用顺序编码制。
的粗提取与鉴定实验的改进
作者:网站采编关键词:
摘要：“DNA 的粗提取与鉴定”实验是人教版高中生物学选修1 专题5 中的一个重要实验［1］，也是新课程标准中要求学生掌握的一个重要内容，该实验不仅能帮助学生加深理解DNA 分子相关的理
“DNA 的粗提取与鉴定”实验是人教版高中生物学选修1 专题5 中的一个重要实验［1］，也是新课程标准中要求学生掌握的一个重要内容，该实验不仅能帮助学生加深理解DNA 分子相关的理论知识，还能帮助学生理解分子生物学的基本实验方法。教材中以植物或鸡血为实验材料进行DNA 的粗提取，并用二苯胺试剂鉴定DNA。但教材中提供的实验方案存在一定的局限性：①鸡血不易采集保存、费用较高；②实验步骤繁琐（8 个步骤、3 次过滤、6 次搅拌）；③实验耗时较长且成功率低，学生在一节课内很难完成。针对这些不足，对教材中的实验做了一些改进。
1 实验改进
1.1 结合前面所学知识，改进实验材料 合理选择实验材料可简化实验操作步骤、降低实验成本。教材中提供的材料洋葱、菜花等提取过程存在研磨困难、操作繁琐等缺点；鸡血则存在取材不便、不易保存等缺点。故用人口腔上皮细胞代替，材料方便易得，同时免去了研磨、过滤等步骤［2］。且学生在学习《必修1·分子与细胞》时已经做过“观察DNA和RNA 在人口腔上皮细胞中的分布”实验，在显微镜下能清晰地观察到被染成绿色的细胞核。因此，从自己的口腔上皮细胞中提取DNA，更有说服力，也更容易建立细胞核、染色体和DNA 之间的联系。
1.2 简化提纯过程，提高实验成功率 教材中用不同浓度的氯化钠和冷乙醇去除杂质，操作繁琐、耗时长，提取率低。故笔者运用化学知识配制了提取液：内含2% SDS、3% EDTA、0.1 g／mL NaCl。EDTA 是DNA 酶的抑制剂，SDS 可使蛋白质变性，0.1 g／mL NaCl 可溶解DNA。综合提纯DNA 的诸多因素，将原本需要多种试剂多个步骤的实验操作，简化为只需要添加DNA 提取液即可达到目的，有助于提高实验的成功率。
1.3 巧用自制教具，改进鉴定DNA 的方法 教材中用二苯胺试剂通过加热煮沸的方法鉴定DNA，然而学生用此种方法进行实验时，多以失败告终。故本实验采用分子生物学中常用的琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA，但考虑到电泳仪及配套显影装置价格昂贵，笔者在国内、外相关文献［3-5］的启发下，用生活中常见的材料自制了一套凝胶电泳装置和凝胶显影装置。
1.3.1 利用生活中常见的材料，自制凝胶电泳装置 笔者自制的凝胶电泳装置（图1）由大小不同的塑料盒、铝箔、梳子、鳄鱼夹导线及串联电池组成：大塑料饭盒相当于电泳槽，两端贴上铝箔制成电极；小塑料盒相当于制胶板，硬纸板裁剪后制成梳子；7 个9 伏锂电池串联后制成电源。
图1 自制凝胶电泳仪
1.3.2 利用生活中常见的材料，自制凝胶显影装置 笔者参考凝胶成像系统观察DNA 分子的原理，利用废弃物品及生活中的廉价材料自制了一套凝胶显影装置，用以观察凝胶中的DNA 分子（图2）。该装置由不透光的板材裁剪、拼装后制成暗箱，并在外壳上端打孔安装摄像头，内接波长为254 nm 的紫外灯灯管，接通电源后便可用于观察凝胶中的DNA 分子。
图2 自制凝胶显影装置
2 改进后的实验操作
2.1 DNA 的提取
1）通过漱口法取10 mL 口腔上皮细胞样液于塑料小烧杯中；2）加入1 mL 提取液，搅拌均匀；3）加入20 mL（2 倍等体积）95%的冷乙醇，静置1 min 后用玻璃棒缠绕取出DNA 分子；4）将玻璃棒中的DNA 分子溶于0.5 mL 蒸馏水中，备用。
2.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA 的具体操作过程如表1所示。
表1 琼脂糖凝胶电泳实验过程步骤 具体操作溶液配置制作凝胶1）电泳缓冲液：称取5.4 g Tris、2.75 g 硼酸、0.9 g EDTA-Na2 溶于蒸馏水中，定容至100 mL，配置成浓缩母液，用时稀释10 倍2）GenGreen 核酸染料：GenGreen 核酸染料是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA 染料，其灵敏度与EB 相当。热稳定性好，安全无毒3）6×上样缓冲液：50% 甘油+ 0.25% 溴酚蓝1）称取1 g 琼脂糖加入100 mL 电泳缓冲液中，摇匀2）在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解（冷却到60℃，加入100 μL 0.5 μg／mL GenGreen 核酸染料，摇匀）3）水平放置制胶板，在一端插好梳子，并缓慢倒入已冷却至60℃左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面4）待胶凝固后，垂直轻拔梳子1）将凝胶置于大塑料饭盒的中央，槽内加入电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2）将0.1 mL 上样缓冲液（6×）和0.5 mL 待测DNA 样品在洁净载玻片上小心混匀后，用1 mL 注射器加至凝胶的加样孔中，每加完一个样品应更换注射器电泳 1）接通电源，将连接电源负极的鳄鱼夹连在靠近点样孔一侧的电极上，连接正极的鳄鱼夹连接在另一电极上2）观察凝胶中蓝色指示剂的移动。当其移动至距胶板前沿约1 cm 处，可停止电泳观察 1）在自制凝胶显影装置内铺上一张保鲜膜，将凝胶放在上面2）关上显影装置的外门，打开紫外灯（254 nm），通过摄像头进行观察并记录实验结果上样
文章来源：《文物鉴定与鉴赏》 网址: http://www.wwjdyjs.cn/qikandaodu/2021/0708/723.html
上一篇：浅析县级博物馆馆藏文物的数字化保护与管理
下一篇：馆藏清代牧牛图轴的微生物病害研究