古籍《中庸大学》污染霉菌的鉴定及其纸质样品(2)

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摘要：在古籍《中庸大学》中间页天头处检测到菌株，并成功复苏.见图2. 图2 古籍检测位置 2.2 菌落特征及结果 菌落特征：菌落呈广铺的棉絮状，起初为白色致密

在古籍《中庸大学》中间页天头处检测到菌株，并成功复苏.见图2.

图2 古籍检测位置

2.2 菌落特征及结果

菌落特征：菌落呈广铺的棉絮状，起初为白色致密的平坦菌丝，而后边缘出现浅绿的产孢子丛束区，反面无色.

图3 菌落形态图和显微结构图

镜检特征：分生孢子梗菌丝的短侧枝，多分枝；小梗瓶形，中部弯曲；分生孢子椭圆形或长形，单细胞，无色，壁光滑，成堆时绿色.见图3.

2.3 18S rDNA扩增测序结果

取菌株的总DNA为模板，以序列NTS1、NTS8为引物，进行PCR扩增.从测序结果可看出菌株的18SrDNA片段长度均在1800 bp左右.测序结果如下：GGTTCGCTGTCTAGTATAGCATTATACCGCGAAACTGCGAATGGCTCATTATATAAGTTATCGTTTATTTGATAATACTTTACTACTTGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTGAAAATCCCGACTTCGGAAGGGATGTATTTATTAGATTAAAAACCAATGCCCCTCGGGGCTCTCTGGTGAATCATAATAACTAGTCGAATCGACAGGCCTTGTGCCGGCGATGGCTCATTCAAATTTCTTCCCTATCAACTTTCGATGTTTGGGTATTGGCCAAACATGGTGGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCGGAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATCGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGTGCACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCCTCTGCGGAACCCCATGCCCTTCACTGGGTGTGGCGGGGAAACAGGACTTTTACTTTGAAAAAATTAGAGTGCTCAAGGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGATGTTACATTTTTGACGCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGGGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACACAATGAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCTTGATTTTGTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCCGTATTGCTTTGGCAGTACGCCGGCTTCTTAGAGGGACTATCGGCTCAAGCCGATGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTACTCCCTTGGCCGGAAGGCCTGGGTAATCTTGTTAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATCCCTAGTAAGCGCAAGTCATCAGCTTGCGTTGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTCAGTGAGGCGTCCGGACTGGCCCAGAGAGGTGGGCAACCACCACTCAGGGCCGGAAAGCTCTCCAAACTCGGTCATTAGAGAAGAAAAAGAGAAACCGCC

2.4 分子进化树的构建

上述序列构建菌株系统发育树见图4.

根据系统发育树结果，表明菌株与(Accession number)CP0同源性99%，系统发育树结合形态特征，显微镜观察，可确定该菌株为里氏木霉(Trichodermareesei).

注：前边为GenBank登录号；分支点上的数字为自展值百分比；线段0.005 为核苷酸替换率.图4 菌株系统发育树图

2.5 纸质文物霉斑模拟样品制备图

无菌条件下，在宣纸上喷洒霉菌液制备出的霉斑样品模拟图，见图5.

图5 霉斑模拟样品图

2.6 复配清洗剂与加入抗坏血酸后的复配清洗剂清洗宏观对比图

用水、主要成分为木瓜酶的复配清洗剂、加入抗坏血酸的复配清洗剂分别清洗霉斑纸质样品，其中复配清洗剂中木瓜酶浓度为3%，加入抗坏血酸的复配清洗剂中木瓜酶浓度为3%、抗坏血酸浓度为0.06%，清洗条件均为温度为30.7℃、pH为6.0.清洗前后数码图见图6.

注：ABC分别为霉斑纸样清洗前的图片abc分别为用水、木瓜酶复配清洗剂、加入抗坏血酸的复配清洗剂清洗后的数码图片图6 三种溶液对霉斑样品清洗前后数码图

3 结论与讨论

纤维素作为纸张的主要成分，使纸张极易受霉菌的污染，进而形成各种霉斑，因此祛除霉斑是目前古籍修复保护工作的重要任务之一.目前祛霉手段多为化学药品，这有可能对古籍造成二次损害，同时也会出现无法针对性地解决不同霉斑的情况，所以选择专一性、高效性的清洗剂是古籍保护工作的新要求新趋势.考虑到古籍的珍贵与稀缺性，无法直接用于进行实验，我们设计了对古籍上的霉斑进行复苏，而后利用仿古宣纸复制菌斑这一思路，既对古籍的霉菌污染情况进行了分析又解决了无法直接在古籍上进行实验的矛盾.我们通过复苏古籍《中庸大学》的菌株，经分离纯化鉴定为里氏木霉.前期实验室经过筛选已经确定木瓜酶对纸质霉斑有清洗效果，为了更好地祛除霉斑，在生物酶清洗剂中添加抗坏血酸保护酶活性基团，经过比较最终确定利用3%木瓜酶浓度、0.06%抗坏血酸浓度、pH6.0的复配清洗剂在温度为30.7℃对霉斑样品进行清洗的效果良好，此数据为古籍保护过程中霉斑的祛除提供了科学数据.

文章来源：《文物鉴定与鉴赏》 网址: http://www.wwjdyjs.cn/qikandaodu/2020/1026/472.html

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